放射免疫分析
基本原理
RIA的基本原理为:放射性同位素标记的抗原(简称“ 标记抗原 ”)和非标记抗原(标准抗原或待测抗原)同时与数量有限的特异性抗体之间发生竞争性结合(抗原-抗体反应)。由于标记抗原与待测抗原的免疫活性完全相同,对特异性抗体具有同样的亲和力,当标记抗原和抗体为数量恒定时,待测抗原和标记抗原的总量大于抗体上的有效结合点时,标记抗原-抗体复合物的形成将随着待测抗原量的增加而减少,而非结合的或游离的标记抗原则随着待测抗原数量的增加而增加(也就是所谓的竞争结合反应),因此测定标记抗原-抗体或标记抗原即可推出待测抗原的数量。
抗原的放射性标记常常是利用碘发射γ射线的放射性同位素与酪氨酸结合来实现的。病人血清等标本之中所含的是未经放射性标记的抗原(亦可称为“冷”抗原),即待测抗原。总体上来说,特异性抗体之上抗原结合部位的数量是有限的。相对有限的抗原结合部位而言,标记抗原与待测抗原之间属于竞争关系。通过绘制结合曲线,即可计算出病人血清之中待测抗原的确切数量。
在采用这种方法的时候,结合抗原与非结合抗原之间的分离至关重要。最初,为了沉淀和离心抗原-抗体反应所形成的免疫复合物,分离方法采用的是针对第一抗体的第二抗体。后来,在对T3和T4进行RIA测定时,哥伦比亚大学的Werner和Acebedo对RIA方法进行了扩展,采用活性炭悬浊液进行沉淀 。1975年,Acebedo和Hayek等人在BBRC之上发表了人TSH的超微量RIA法 。
优缺点
RIA技术极其敏感而又极其特异,但自动化机台的取得却较受限,且成本也不低。同时,RIA还需要特殊的预防措施,因为其要用到放射性物质。因此,如今RIA在很大程度上已经被ELISA所取代。就ELISA而言,抗原-抗体反应的测定采用的是颜色变化信号,而不是放射性信号。
参见
免疫放射分析
免疫学
检验医学
放射免疫学
抗原-抗体反应
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