DNA测序
用途
历史
基本方法
Maxam-Gilbert测序法
马克萨姆-吉尔伯特测序(英语:Maxam-Gilbert sequencing)是一项由 阿伦·马克萨姆 ( 英语 : Allan Maxam ) 与沃尔特·吉尔伯特于1976~1977年间开发的DNA测序方法。此项方法基于:对核碱基特异性地进行局部化学改性,接下来在改性核苷酸毗邻的位点处DNA骨架发生断裂 。
Sanger测序法
Sanger(桑格)双脱氧链终止法是弗雷德里克·桑格(Frederick Sanger)于1975年发明的。测序过程需要先做一个聚合酶连锁反应(PCR)。PCR过程中,双脱氧核苷酸可能随机的被加入到正在合成中的DNA片段里。由于双脱氧核糖核苷酸又少了一个氧原子,一旦它被加入到DNA链上,这个DNA链就不能继续增加长度。最终的结果是获得所有可能获得的、不同长度的DNA片段。目前最普遍最先进的方法,是将双脱氧核糖核苷酸进行不同荧光标记。将PCR反应获得的总DNA通过毛细管电泳分离,跑到最末端的DNA就可以在激光的作用下发出荧光。由于ddATP, ddGTP, ddCTP, ddTTP(4种双脱氧核糖核苷酸)荧光标记不同,计算机可以自动根据颜色判断该位置上碱基究竟是A,T,G,C中的哪一个 。
高级方法和de novo测序法
霰弹枪定序法
霰弹枪定序法 ( Shotgun sequencing ,又称 鸟枪法 )是一种广泛使用的为长DNA测序的方法,比传统的定序法快速,但精确度较差。曾经使用于塞雷拉基因组(Celera Genomics)公司所主持的人类基因组计划。
Bridge PCR
新一代测序
随着人们对低成本测序的需求与日俱增,推动了 高通量测序 (或称为 二代测序 、 新一代测序 、 下一代测序 )的发展,这些技术对测序过程多路复用,同时产生上千或上百万条序列 。高通量测序技术的目的是降低DNA测序的成本,这个成本比同样可实现测序的染料终止法来得低得多 。超高通量测序过程中可同时运行高达500,000次的边合成边测序 。
需要根据多个片段序列所重叠的区域将它们全部组装起来。
454生物科学和焦磷酸测序法
454测序法由454生物科学发明,是一个类似焦磷酸测序法的新方法。2003年向GenBank提交了一个腺病毒全序列 ,使得他们的技术成为Sanger测序法后第一个被用来测生物基因组全序列的新方法。454使用类似于焦磷酸测序的方法,有着相当高的读取速度,大约为5小时可以测两千万碱基对 。
正在开发的测序法
纳米孔DNA测序法
参见
蛋白质定序
已测序的生物
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